目的:借助急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型小鼠血清和肠类器官培养技术,建立模拟aGVHD肠道损伤的体外模型并探索类器官水平aGVHD肠道损伤的规律.方法:以20-22 g雌性C57BL/6小鼠和20-22 g雌性BALB/c小鼠分别作为骨髓移植的供鼠和受鼠.受鼠接受致死剂量(8.0 Gy)的γ射线全身照射后的4-6 h内,输注供鼠来源骨髓细胞(1 ×107/只,n=20)及脾脏有核细胞(5 × 106/只,n=20)混合液共0.25 ml,建立aGVHD小鼠模型(n=20).于造模后d 7麻醉aGVHD小鼠,摘取眼球取血,静置离心后收取血清.分离C57小鼠小肠隐窝,在模拟体内肠道干细胞生长增殖的3D培养体系中培养.分别在类器官培养基中加入5%、10%和20%体积比例的aGVHD血清,培养3 d,倒置显微镜下观察小肠类器官的形成过程,比较小肠类器官形态.为了进一步评估,收集aGVHD肠道类器官并观察其病理变化.结合HE染色进行肠类器官形态评价;结合Alcian Blue染色,观察aGVHD小肠类器官分泌功能;结合免疫组化技术,分析血清浓度在5%、10%和20%条件下肠类器官中Lgr5+和Clu+肠干细胞分布及变化规律.结果:成功建立了体外模拟aGVHD肠道损伤类器官模型.HE染色结果显示,5%浓度血清组肠道类器官形态明显较10%和20%组完整,随aGVHD血清浓度的升高,肠道类器官形态破坏加重.5%aGVHD血清组小肠类器官数量最多,出芽率最高,病理评分最低;20%aGVHD血清组形态破坏严重,没有出芽,病理评分最高(t=3.668、4.334、5.309,P<0.05)oAlcian blue染色结果显示,20%aGVHD血清组肠道类器官分泌功能较5%组和10%组类器官弱,未见杯状细胞分布及其分泌黏液染色.免疫组化结果表明,5%组的aGVHD血清组的肠类器官中Lgr5+细胞数量较10%aGVHD和20%的aGVHD血清组肠道类器官多,基本未见Clu+细胞,相反,20%aGVHD血清组Lgr5+细胞破坏严重,无法观察,Clu*细胞比例明显升高.结论:aGVHD血清浓度影响体外小肠类器官数量、功能和肠干细胞的数量.血清浓度越高类器官发生损伤风险越大,揭示了 aGVHD场景中肠类器官的形成和功能规律,为开展aGVHD肠损伤领域研究提供了新的工具.