目的 观察烟草烟雾暴露对体外培养的人支气管上皮细胞铁死亡的影响并分析其机制。方法 正常人 支气管上皮细胞 BEAS-2B 分别使用 0、0. 5%、1. 0% 和 2. 0% 的烟草烟雾提取物 (CSE) 处理 24 h, 即为对照组、0. 5% CSE组、1. 0% CSE组及 2. 0% CSE组。采用 EdU染色观察细胞增殖能力, CCK-8法观察细胞活性; 比色法检测细胞 Fe2+ 水平和还原型谷胱甘肽 (GSH) 水平; 流式细胞术观察细胞活性氧 (ROS) 水平; q-PCR法及Western blotting法观察 铁死亡相关因子谷胱甘肽过氧化酶4 (GPx4)、铁蛋白重链1 (FTH1) 及环加氧酶2 (Ptgs2) mRNA及蛋白; 碘化丙啶染 色观察细胞死亡情况; 透射电镜观察细胞线粒体结构。将 BEAS-2B 细胞分为 Fer-1 组、Nec-1 组、Z-VAD-FMK 组及 CSE组, 分别给予铁死亡抑制剂Fer-1、坏死抑制剂Nec-1、凋亡抑制剂Z-VAD-FMK及不加试剂预处理后, 加入2. 0% CSE培养基处理24 h。采用CCK-8法观察各组细胞活性; 比色法检测Fer-1组、CSE组细胞Fe2+ 及GSH水平, 流式细 胞术观察Fer-1组、CSE组细胞ROS水平; q-PCR法及Western blotting法观察Fer-1组、CSE组细胞FTH1、Ptgs2、GPx4 mRNA及蛋白表达; 碘化丙啶染色观察Fer-1组、CSE组细胞死亡情况。结果 EdU阳性细胞数、细胞OD值对照组> 0. 5% CSE 组>1. 0% CSE 组>2. 0% CSE 组; 细胞 Fe2+ 水平、ROS 水平对照组<0. 5% CSE 组<1. 0% CSE 组<2. 0% CSE 组, GSH 水平对照组>0. 5% CSE 组>1. 0% CSE 组>2. 0% CSE 组; 细胞 FTH1、GPx4 mRNA 及蛋白对照组>0. 5% CSE 组>1. 0% CSE 组>2. 0% CSE 组, Ptgs2 mRNA 及蛋白对照组<0. 5% CSE 组<1. 0% CSE 组<2. 0% CSE 组; 细胞死亡率 对照组<0. 5% CSE 组<1. 0% CSE 组<2. 0% CSE 组 (P均<0. 05) 。透射电镜结果显示, BEAS-2B细胞经 2. 0% CSE 处 理后出现线粒体萎缩变小, 线粒体双层膜密度增高, 线粒体脊减少甚至消失等典型铁死亡线粒体超微结构改变。细 胞 OD 值 Fer-1组>Nec-1组、Z-VAD-FMK 组、CSE 组; Fer-1组细胞 Fe2+ 、ROS水平低于 CSE 组, GSH 水平高于 CSE 组; Fer-1 组细胞 FTH1、GPx4 mRNA 及蛋白高于 CSE 组, Ptgs2 mRNA 及蛋白低于 CSE 组; 细胞死亡率 Fer-1 组低于 CSE 组 (P均<0. 05) 。结论 烟草烟雾暴露可诱导BEAS-2B细胞发生铁死亡, 该作用可能通过介导BEAS-2B细胞铁超载 和氧化还原紊乱来实现。 [ABSTRACT FROM AUTHOR]