Bu çalışmanın amacı, 32 yıl önce dondurulmuş olan Esmer ırkı boğa spermalarının akım sitometri yoluyla spermatolojik parametrelerini araştırmak ve sıvı nitrojen içerisinde saklama süresinin in vitro embriyo üretim oranlarını nasıl etkilediğini araştırmaktır. Bu amaçla erken dönem nekrotik, nekrotik, canlı ve apoptotik spermatozoa yoğunlukları akım sitometri yöntemi ile incelendi ve in vitro fertilizasyon yetenekleri araştırıldı. Akım sitometri cihazında apoptotik değişimlerin analizi için AnnexinV/PI-FITC® kullanıldı. Mezhaba materyali yumurtalıklarından elde edilen oositler in vitro embriyo üretimi için kullanıldı. Kontrol grubu olarak, son iki yılda donmuş aynı cinse ait spermler kullanıldı. 32 yıl önce dondurulmuş spermalarda erken nekrotik spermatozoa düzeylerinin kontrol grubuna göre daha düşük ancak nekrotik spermatozoa düzeylerinin ise daha yüksek olduğu (P<0.01) gözlenmiştir. Dolayısıyla eski ile yeni dondurulmuş olanlarda, erken nekrotik ve nekrotik spermatozoa düzeylerinde aksi yönde sonuçlar alınmıştır. Eski spermatozoonlardaki ilk bölünme oranları kontrol grubuna göre daha düşük bulundu (P<0.05), blastosiste ulaşma oranı da kontrol grubuna göre daha düşüktü (P<0.01). Sonuç olarak, spermaların sıvı azot içerisinde uzun süre muhafaza edilmesi ile bazı spermatolojik parametrelerin olumsuz olarak etkilenebildiği ve uzun muhafaza sürecinde Esmer boğa spermasının fertilite kabiliyetlerinin azaldığı düşünülmüştür. [ABSTRACT FROM AUTHOR]