El consumo de hongos comestibles ha incrementado mundialmente debido a sus propiedades alimenticias y funcionales. En el estado de Guanajuato, México la producción de estos hongos depende de la importación de cepas de distintas especies. Lo anterior, a falta del aislamiento y caracterización de recursos micogenéticos regionales como es el caso del "Hongo del maguey". El objetivo del estudio fue realizar la identificación molecular, caracterización morfológica y bioquímica antioxidante in vitro de una cepa de Pleurotus sp. en Guanajuato, México, y compararle con cepas comerciales. La hipótesis planteada se basa en la posibilidad de aislar una cepa regional con características del micelio adecuadas para su cultivo in vitro. Se colectó y aisló una cepa silvestre denominada UG-01 de una planta de Agave mapisaga y posteriormente se determinó su identidad por la secuenciación de la región ITS1-5.8S-ITS2. La cepa se cultivó in vitro y se caracterizó el micelio, como control se incluyeron una cepa experimental y cuatro comerciales. Los resultados se analizaron en un diseño completamente al azar. La cepa del "Hongo del Maguey" se identificó como Pleurotus djamor. Con base en el sistema CIE L*a*b se obtuvieron las coordenadas 86.2, -5.6 y -4.1; así como, 33.1 y 21.7 para Hue y Croma. La cepa UG-01 mostró la mayor tasa de crecimiento con textura algodonosa y sin presencia de exudados. También, presentó la mayor concentración de prolina, compuestos fenólicos y flavonoides, además del menor remanente del radical 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH). Como conclusión, fue posible cultivar in vitro el micelio del "Hongo del Maguey", el cual mostró mejores características morfológicas y bioquímicas antioxidantes respecto a las cepas comerciales importadas. [ABSTRACT FROM AUTHOR]