目的·利用软骨脱细胞基质(acellular cartilage matrix, ACM) 与复合天然丝素蛋白(silk fibroin, SF) 生物材料, 构建具有双网络交联的生物活性组织工程支架, 用于软骨组织再生。方法·用核酸酶消化法消化掉软骨组织中细胞相关的 免疫原性成分, 并将细胞外基质相关糖蛋白、胶原结构保留, 用DNA、组织糖胺多糖、胶原定量试剂盒通过分光光度仪检 测软骨组织脱细胞效率。将ACM和SF 配置成混合溶液, 通过加入乙二醇二缩水甘油醚与两者所含羟基、氨基发生亲核交 联反应, 冷冻干燥制成多孔仿生支架(n=5), 同时以相同方法制备仅含有ACM或SF 的多孔支架(n=5)。扫描电子显微镜 (scanning electron microscope, SEM) 观察支架微观孔隙结构, 并通过力学测试对不同组支架的力学强度、弹性模量以及回 弹性进行评估, 以吸水率反映支架的内外物质交换能力。分离并培养兔耳软骨细胞, 接种于ACM-SF 支架上, SEM观察培 养1、4、7 d 后细胞在支架上的黏附、分布与基质分泌情况, 活/死细胞双染色观察细胞活力状况, 通过CCK-8 检测支架的 细胞毒性, 并于裸鼠皮下植入细胞支架复合物, 体内培养4 周、8 周后, 行组织学检测。各组间比较采用单因素方差分析。 P<0.05 为差异具有统计学意义。结果·经酶消化后的软骨脱细胞基质几乎无细胞残留, 并保留了软骨细胞外基质活性成 分。ACM-SF 制备的复合支架具有相互连通的微孔结构和良好的弹性, 湿态下多次压缩后能恢复原状, ACM-SF 的吸水率 达到了近20 倍, 为细胞黏附环境提供了有效的物质交换条件。此外, 该支架无生物毒性, 具有促进软骨细胞增殖的能力; 组织学检测显示, ACM-SF 支架可在体内再生均质、典型的软骨组织。结论·ACM-SF 复合多孔支架具有良好的仿生微环 境, 可应用于组织工程软骨再生。 [ABSTRACT FROM AUTHOR]