Amaç: Bu çalışmanın amacı, hepatik 6-fosfoglukonat dehidrojenazı (6PGD), sarı kedi balığından saflaştırmak ve karakterize etmektir. Bununla birlikte, farklı metal iyonlarının (Cd2+, Cu2+ ve Al3+) enzim üzerine olan etkilerini incelemektir.
Metod: Saflaştırma için 2’, 5’-ADP Sepharose 4B kromatografi prosedürü; 6PGD’nin saflığı ve moleküler ağırlığı için SDS-PAGE metodu; 6PGD aktivitesi ölçümü için NADP+’nın NADPH 340 nm’de ölçümü kullanılmıştır. Optimum ısı, pH ve iyonik güç bulunmuştur. Substratlar ve ürün kinetiği için metal iyonlarının etkisi çalışılmıştır.
Bulgular: Özgül 6PGD aktivitesi, 5.75 U/mg, ve molekül ağırlığı, tek bir bant olarak 50.1 kDa bulunmuştur. Otimum pH, ısı ve iyonik güç, sırasıyla 7.85, 60°C and 100 mM olarak bulunmuştur. Enzimin aktivasyon enerjisi 17.37 kkal/mol’dür. 6PGA ve NADP+’nin Km değerleri sırasıyla, 169.3 μM ve 91.1 μM olarak ve Vmax değerleri sırasıyla 5.1096 U/mg ve 6.6776 U/mg olarak gösterilmiştir. 6PGD, NADPH tarafından 41.5 μM Ki değeri ile kompetatif olarak inhibe edilmektedir. Cd2+, Cu2+ ve Al3+’un enzim üzerine inhibisyon etkileri gösterilmiştir. Enzimi Cd2+ kompetatif olarak inhibe etmektedir. Cd2+ ve Cu2+’ın IC50 değerleri sırasıyla 0.16, 0.41mM olarak bulunmuştur. Al3+’ün enzim aktivitesi üzerine bir etkisi gözlenmemiştir.
Sonuç: Çalışma balık 6PGD’sinin saflaştırılması ve kinetic özelliklerinin incelenmesi bakımından daha içerikli bir bilgi sunmaktadır. Balık 6PGD’si üzerine in vitro şartlarda metal iyonlarının etkisinin incelendiği ilk çalışmadır.