Biochemische und biophysikalische Charakterisierung von CRYPTOCHROMEN als circadiane Photorezeptoren, integrale Uhrenproteine und Magnetorezeptoren
- Resource Type
- Authors
- Breitkreuz, Helena
- Source
- Subject
- Maus / Cryptochrom
Blaulicht / Rezeptor
Tagesrhythmen
Transkriptionsfaktor
Baculoviren / Genexpression
ddc:540
- Language
- German
Cryptochrome sind Flavoproteine, die im Gegensatz zu phylogenetisch verwandten DNA-Reparaturenzymen Photolyasen die Rolle circadianen Blaulichtrezeptoren, integralen Uhrenproteine und Magnetorezeptoren übernehmen. Im Rahmen der vorliegenden Arbeit wurden Maus-Cryptochrome (mCRY1,2) sowie deren mit BMAL1 interagierende Fragmente mittels \(\textit {E. coli-}\) bzw. Baculovirussysteme heterolog exprimiert und Präparationsprotokolle etabliert. Mit Hilfe der Interaktionsstudien wurden die Komplexe der C-terminalen Fragmente von BMAL1 und mCRY1/2 kinetisch analysiert. Mittels massenspektrometrischen und spektroskopischen Untersuchungen an Drosophila-Cryptochrom (dCRY) konnte das nicht-kovalent gebundene Flavinchromophor in seiner oxidierten Form und als ein stabiles Pterin-Kofaktor ein 10-Formyldihydrofolat quantifiziert werden. Das Zusammenspiel der absorptionsspektroskopischen und zeitaufgelösten Fluoreszenz-Messungen erlaubte erweiterte Charakterisierung des bereits postulierten Photozyklus.