目的·探究乳腺癌易感基因1 (breast cancer susceptibility gene 1, BRCA1) 第1325 位精氨酸变为赖氨酸(R1325K 突变) 对胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ增殖和凋亡的影响。方法·使用BRCA1 野生型过表达慢病毒、BRCA1 R1325K突变 过表达慢病毒以及阴性对照慢病毒载体构建胆囊癌细胞系GBC-SD 和NOZ 稳转株。细胞分为不含目的基因的对照组、 BRCA1 野生型组及BRCA1 突变组, 并通过Western blotting 验证目的蛋白BRCA1 的表达情况。选用针对BRCA1 突变的抑制 剂奥拉帕利(Olaparib) 20 μmol/L处理BRCA1 突变组胆囊癌细胞, 并根据目的蛋白的表达情况和加药与否将胆囊癌细胞系 分为对照组、BRCA1 野生型组、BRCA1 突变组和BRCA1 突变+Olaparib 组。通过CCK8 实验和克隆形成实验观察BRCA1 R1325K突变对胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ增殖能力及克隆形成能力的影响, 通过TUNEL实验观察BRCA1 R1325K突变 对胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ凋亡情况的影响, 并通过Western blotting 检测凋亡相关蛋白cleaved PARP、Bcl-2 和Bax 的 表达情况。使用抑制剂Olaparib 处理BRCA1 R1325K突变过表达胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ, 并检测BRCA1 R1325K突 变引起的相应表型改变(促进增殖、增强克隆形成能力和抑制凋亡) 是否能被抑制剂所逆转。结果·通过CCK8 实验和克 隆形成实验发现:相较于对照组及BRCA1 野生型组, BRCA1 R1325K突变能够促进胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ 的增殖, 并提高其克隆形成能力;抑制剂Olaparib 处理则能够抑制BRCA1 突变胆囊癌细胞系的增殖(均P<0.05)。通过TUNEL 和 Western blotting 实验发现:相较于对照组, 野生型BRCA1 基因过表达能够诱导胆囊癌细胞系GBC-SD 和NOZ 的凋亡; BRCA1 突变组相较于对照组和BRCA1 野生型组, 有抵抗凋亡的作用, 且升高了凋亡抑制蛋白Bcl-2 的表达并降低了促凋亡 蛋白Bax 的表达(P<0.05)。结论·BRCA1 R1325K突变能够促进胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ的增殖并抑制其凋亡。. [ABSTRACT FROM AUTHOR]