O objetivo deste estudo foi otimizar e implementar um sistema fiável e econômico para a detecção molecular do alelo mutante CVM (malformação vertebral complexa; c.559G>T; SLC35A3) por meio da análise HRM, assim como analisar sua presença em uma amostra representativa de vacas Holandesas do Banco de ADN do Instituto Nacional de Pesquisa Agropecuária de Uruguai. A otimização da metodologia HRM no equipamento RotorGene™ 6000 (Corbett Life Science, Austrália) através da amplificação dos produtos de PCR de 79 pb permitiu diferenciar os dois genótipos: o homozigoto de tipo salvagem (GG) e o heterozigoto que presenta a mutação CVM (GT). Verificou-se que a frequência do alelo mutante (T) para CVM na amostra analisada foi alta, de q = 0,032, enquanto que a prevalência de vacas portadoras da mutação foi 6,45%. Concluiu-se que a análise por PCR-HRM é uma técnica rápida, facilmente interpretável, de baixo custo e alta precisão para a detecção dessa mutação no gado Holandês, que poderia ser implementada em programas de seleção genética. [ABSTRACT FROM AUTHOR]