Previous studies reported that Dipsaci Radix is an effective anti-Alzheimer’s disease (anti-AD), and so Dipsacus Radix is a good choice for further anti-AD research. Although it has been suggested that water extract, saponins fraction and akebia saponin D had the capacity of anti-AD, there is still a lack of excavation of active components from Dipsacus Radix. In addition, the structure elucidation of the compounds is also insufficient, and there is no finding about the quality control standard of Dipsacus Radix. To do in-depth confirmation of the anti-AD-related activities of extract and fractions of Dipsacus Radix, cholinesterase (acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BChE)), β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1 (BACE1), and the formation of advanced glycation end-product (AGE) assays were applied to evaluate their efficiency of inhibition without precedent. As results suggested, thanks to water fraction possessing strongest inhibition, bioassay-guided isolation was performed from the water fraction of Dipsacus Radix. Thirteen compounds, including eleven terpenoid compounds and two phenolic compounds, were isolated from water fraction of Dipsaci Radix. Loganic acid (DR1), akebia saponin D (DR2), dipsacus saponin X (DR3), sweroside (DR4), neochlorogenic acid (DR5), cauloside A (DR6), caffeic acid (DR7), dipsacus saponin A (DR8), dipsacus saponin IV (DR9), dipsacus saponin V (DR10), HN saponin F (DR11), dipsacus saponin C (DR12), dipsacus saponin XI (DR13) were identified by 1H-NMR, 13C-NMR, and ESI/LTQ-Orbitrap-HRMS techniques.The above four activity-assays were also conducted with isolated terpenoid compounds for a final purpose of excavating new potential active components from Dipsacus Radix, as results suggested, DR-3, 9 and 13 possessed much more powerful AChE inhibitory activities. Compared with DR12 and DR13 which had relatively strong inhibition, DR6 exhibited the strongest BChE inhibitory activity among the terpenoids. DR8 and DR11 reacted intensively to BACE1 inhibition. DR 9, 10, 11, 12 and 13 were strong inhibitors to effect AGE formation, even more inhibitory than aminoguanidine hydrochloride (the positive control). Triterpene saponins maintained their inhibitory advantage over iridoids and DR13 showed remarkably high inhibitory activities in above four inhibition tests. In addition, we established potential quality control standards using a developed HPLC method that simultaneously analyzed the active target components. This study significantly provided a new foundation of the potential capacities of extract and fractions as well as bioactive components from Dipsaci Radix for AD remedy and simultaneous HPLC analysis was meaningful to control the standard content of target compounds from Dipsaci Radix.
Dipsacus Radix가 항알츠하이머병(안티AD)에 효과가 있다는 기존 연구 결과에 따르면 Dipsacus Radix는 항알츠하이머 연구에 좋은 선택이 된다. 비록 물 추출물, 사포닌 분율, 아케비아 사포닌 D가 항 AD 기능을 가지고 있다고 보고되었지만 Dipsacus Radix에서 활성 성분을 추출하는 것은 여전히 부족하다. 또한 화합물의 구조 설명도 미흡하여 Dipsacus Radix의 품질관리 기준에 대한 연구결과가 없다. Dipsacus Radix의 추출물 및 분획물의 항 AD 관련 활성을 심층적으로 확인하기 위해, 사전 없이 억제 효율성을 평가하기 위해 콜린스테라제(아세틸콜린스테라제(ACHE)와 부틸콜린스테라제(BCHE)), β-사이트 아밀로이드 전구체 단백질 분해효소 1(BACE1), AGE 방법을 적용했다. 가장 강력한 억제를 가진 물 분율 덕분에, Dipsacus Radix의 물 분획물에서 생체 측정 유도 분리가 수행되었다. 11개의 테르페노이드 화합물과 2개의 페놀 화합물을 포함한 13개의 화합물이 Dipsacus Radix의 물 분율에서 분리되었다. 본 연구에서, 11개의 테르페노이드 화합물과 2개의 페놀 화합물을 포함한 13개의 화합물이 Dipsaci Radix에서 분리되었다. Loganic acid (DR1), akebia saponin D (DR2), dipsacus saponin X (DR3), sweroside (DR4), neochlorogenic acid (DR5), cauloside A (DR6), caffeic acid (DR7), dipsacus saponin A (DR8), dipsacus saponin IV (DR9), dipsacus saponin V (DR10), HN saponin F (DR11), dipsacus saponin C (DR12), dipsacus saponin XI (DR13) 은 이전 문헌을 참조하여 1H-NMR, 13C-NMR, and ESI/LTQ-Orbitrap-HRMS 기법을 통해 식별되었다.또한 항 AD 억제 활성을 평가하기 위해 격리된 테르페노이드 화합물을 사용하여 네 활성방법도 평가를 수행했으며, Dipsaci Radix에서 새로운 잠재적 활성 성분을 발굴하기 위해 DR-3, 9 및 13은 훨씬 더 강력한 ACHE 억제 활성을 보유했다. 상대적으로 강한 억제를 가졌던 DR12와 DR13과 비교했을 때, DR6는 가장 강력한 BChE 억제 활성을 보였다. DR8과 DR11은 BACE1 억제에 집중적으로 반응했다. DR 9, 10, 11, 12 및 13은 AGE 형성에 영향을 미치는 강력한 억제제였다. 특히 트리터펜 사포닌은 이리도이드보다 억제 우위를 유지했다. DR13은 위의 네 가지 억제 테스트에서 현저하게 높은 억제 활동을 보였다.또한, 활성 대상 화합물을 동시에 분석하는 개발된 HPLC 방법을 사용하여 잠재적 품질 관리 표준을 확립하였다. 본 연구는 AD 치료를 위한 Dipsaci Radix의 생물 활성 성분뿐만 아니라 추출물과 분수의 잠재적 용량에 대한 새로운 기초를 제공하였다. 동시 HPLC 분석은 Dipsaci Radix에서 표적 화합물의 표준 함량을 제어하는데 의미가 있었다.