目的 观察肝细胞肝癌(HCC)患者外周血白细胞介素-35(IL-35)水平和CD4 + CD25 + CD127dim/-调节性T细胞(Treg)比例,评估IL-35 对Treg数量和功能的影响.方法 共有51 例HCC患者和25 例对照者,分离外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,实时定量PCR法检测PBMC中IL-35 亚基mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血IL-35 水平,流式细胞术检测PBMC中CD4+ CD25+ CD127dim/-Treg比例.使用重组人IL-35(1 ng/ml)刺激HCC组PBMC 24 h,观察Treg比例和EBI3、IL-12p35 mRNA相对表达量的变化.分选17 例HCC患者的Treg,经重组人IL-35刺激后与自体PBMC共培养48 h,通过检测细胞增殖和细胞因子表达评估IL-35 对Treg功能的影响.组间比较采用t检验或配对t检验.结果 HCC组血浆IL-35 水平显著高于对照组[(1024±218.0)pg/ml比(297.6±77.78)pg/ml,t = 16.12,P<0.0001)],HCC组PBMC中EBI3 和IL-12p35 mRNA相对表达量均显著高于 NC组(P<0.0001).HCC组CD4+ CD25+ CD127dim-Treg比例显著高于对照组[(6.35±1.46)%比(4.55±0.90)%,t =5.641,P<0.0001)],HCC组中CD4+ CD25+ CD127dim/-Treg比例与血浆IL-35 水平呈显著正相关(γ =0.400,P =0.0036).HCC组PBMC经IL-35 刺激后CD4+ CD25+ CD127dim/-Treg比例较无IL-35 刺激升高(P =0.041),EBI3 和IL-12p35 mRNA相对表达量亦升高(P<0.001).HCC患者纯化的CD4+ CD25+ CD127dim-Treg经IL-35 刺激后,免疫检查点受体表达升高(P<0.05),抑制自体PBMC增殖的能力增强,共培养系统中细胞数量减少(P =0.023).IFN-γ分泌水平在经IL-35 刺激的Treg中显著降低(P =0.0002),而IL-10 和IL-35 分泌水平在经IL-35 刺激的Treg中显著升高(P<0.05).结论 HCC患者中IL-35 水平升高,增强Treg免疫抑制活性.