在超积累植物东南景天对镉的区隔化过程中, 叶肉细胞等内含大型液泡的薄壁细胞起重要作用。本文旨在建立并优化其叶肉细胞原生质体和液泡的提取和纯化技术, 在技术层面上为东南景天的镉区隔化机理研究奠定基础, 有助于深入探明其超积累镉的生理与分子机理。 优化了东南景天叶片原生质体的提取和纯化技术, 并建立了能较高效率获得膜完整性好、数量多、纯度高的液泡提取方法。 主要包括原生质体提取、液泡粗提和液泡纯化。原生质体提取: 取东南景天叶片, 切成1~2 mm的细条状后浸入经预热过的细胞裂解液中, 震荡2 h 后过滤, 离心清洗后获得原生质体。液泡粗提: 采用1-丙磺酸浓度为0.675 mmol/L 的原生质体裂解液裂解原生质体, 离心后获得粗提的液泡, 并加入含0.8 mol/L 甘露醇的液泡保护液。液泡纯化: 往初提液泡的悬浮液下层加入质量体积比浓度为0.10 g/ml 的Ficoll 溶液, 进行密度梯度离心, 获取纯化的液泡。 细胞裂解液的预热处理可加速细胞壁降解, 裂解时间设置为2 h 有利于原生质体的高效提取; 通过对原生质体裂解液浓度、细胞保护液浓度和梯度离心等参数的改良, 可有效提取叶片细胞原生质体中的液泡。