研究旨在改造株链球菌来源的α-半乳糖苷酶基因Gal27A, 获得耐热性高的突变体。在常规PCR 体 系中加入不同水平的MnCl2, 将基因克隆至载体pGAPZαA 并成功构建表达酶产物的重组质粒pGAPZαA-Gal27A。 将线性化的重组质粒电转至毕赤酵母GS115, 在含有100 g/L 博来霉素的YPDS 平板上筛选耐热性提高的突变体, 通过pNPG 的方法测定重组酶的酶学性质为最适温度65 ℃, 最适pH 值6.5, Ag2+、Hg2+对重组酶的酶学活性具有 明显的抑制作用, Cu2+对重组酶的酶活性具有促进作用。研究表明, 试验成功构建耐热α-半乳糖苷酶高效表达菌 株29 和54, 在55 ℃保温10 min 与同等条件下的野生型进行对比, 加热前后的保留酶活比的增幅大于45%. [ABSTRACT FROM AUTHOR]