研究旨在开发耐热纤维素酶, 以提高畜禽对纤维素饲料的利用率和养殖经济效益。从蛋白质信息数 据库UniProt中获取热纤梭菌(aostrUdium thermocellum)葡聚糖外切酶CelS的序列信息, 经信号肽删除和密码子 优化, 利用大肠杆菌表达系统, 实现了 CelS的过量表达。通过自诱导表达条件优化, 有效提高了 CelS可溶表达的 比例。将胞内上清液通过镰离子亲和层析和热处理分离纯化获得可溶CelS,将胞内沉淀通过洗涤、变性和复性后 获得包涵体复性CelSo酶学特性检测发现, 两种表达形式CelS的酶活力无显著性差异, 最适反应温度均为70 °C, 最适反应pH值为5.5-6.0,对无定形纤维素(PASC)的活性最高, 对结晶纤维素(Avicel)和玉米秸秆(CS)次 之o CelS与海栖热袍菌(Tbermotoga maritima)葡聚糖内切酶EG12B协同作用水解CS,比单独水解酶活力提鬲了 81.8%。试验结果表明, 重组CelS表现出优越的耐热性能和纤维素水解活性, 为进一步开发酶制剂提供了有力支 持, 有利于提高纤维素饲料的利用率. [ABSTRACT FROM AUTHOR]