目的 观察益肾通络方(熟地黄, 黄芪, 山萸肉, 丹参, 大黄, 鬼箭羽, 血竭)对 db / db 小鼠足细 胞及小鼠肾足细胞 MPC-5 焦亡的影响,探讨其抑制糖尿病肾脏疾病足细胞焦亡改善足细胞损伤的 可能作用机制. 方法 ①体内实验. 以 db / db 小鼠(模型组及各给药组)及同窝对照 db / m 小鼠 (对照组)为研究对象. db / db 小鼠按体质量随机分为 5 组,除模型组外,其余 4 组分别按照每日 1. 0, 2. 5, 5. 0 g / kg 剂量给予益肾通络方及 10 mg / kg 缬沙坦灌胃,模型组及对照组给予等量蒸馏 水. 治疗 8 周后,透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织中足细胞数量与形态变化情况;对肾脏组织进 行 TUNEL 染色,同时利用免疫荧光技术标记足细胞标志蛋白 Wilms 瘤基因 1(WT-1);酶联免疫吸 附测定法(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β), 白细胞介素-18(IL-18)水平;利用实时荧 光定量 PCR, Western blotting 检测小鼠肾脏组织中 NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NLRP3), 胱天蛋白酶-1(CASP1), 焦孔素 D(GSDMD)mRNA 及蛋白表达和激活情况. ②体外实验. 以糖基 化终末期产物(AGEs) 诱导的小鼠肾足细胞 MPC-5 为研究对象,利用 CCK-8 法及乳酸脱氢酶 (LDH)释放检测技术,评价细胞成活率及细胞膜完整性;利用 Q-PCR, Western blotting 检测 MPC-5 细胞中 NLRP3, CASP1, GSDMD 的 mRNA 及蛋白表达和激活情况. 结果 ①体内实验. 与对照组 相比,模型组小鼠肾脏足细胞足突出现融合,基底膜明显增厚,肾脏组织 TUNEL 染色阳性细胞比例 增加,WT-1 阳性表达率下降,血清中 IL-1β, IL-18 含量增加,NLRP3, CASP1, GSDMD, IL-1β 及 IL-18 mRNA 表达上调,NLRP3 蛋白表达上调,CASP1, GSDMD 被激活(均 P<0. 05);与模型组相比,益肾 通络方不同剂量干预后,肾脏组织的足细胞损伤情况缓解,肾脏组织 TUNEL 阳性细胞明显减少,血 清中 IL-1β, IL-18 含量下降,NLRP3, CASP1, GSDMD mRNA 表达下调,NLRP3 蛋白表达下调, CASP1, GSDMD 通路蛋白激活被抑制(均 P<0. 05). ②体外实验. 与对照组相比,模型组 MPC-5 细胞活性下降,LDH 释放增加,NLRP3, CASP1, GSDMD, IL-1β 及 IL-18 mRNA 表达上调,NLRP3 蛋白表达上调,CASP1, GSDMD 被激活(均 P<0. 05) ;给予益肾通络方作用后,足细胞损伤情况 改善,LDH 释 放 率 下 降, NLRP3, CASP1, GSDMD mRNA 表 达 下 调, NLRP3 蛋 白 表 达 下 调, CASP1, GSDMD 通路蛋白激活被抑制(均 P<0. 05) . 结论 益肾通络方可能通过抑制 NLRP3 / CASP1 / GSDMD 信号通路的激活,减少足细胞焦亡的发生,进而发挥改善糖尿病肾脏疾病小鼠足 细胞损伤的作用。 [ABSTRACT FROM AUTHOR]